Cryptococcus neoformans Test 미생물학 진균학 - 진단검사의학

 

cryptococcus neoformans의 생화학적 식별에는 진균의 특정 특성과 대사 특성을 결정하기 위한 일련의 검사실 테스트 수행이 포함됩니다. 이러한 테스트는 C. neoformans를 다른 유사한 종과 구별하는 데 도움이 되며 정확한 식별을 위한 정보를 제공합니다.

다음은 Cryptococcus neoformans를 위해 일반적으로 사용되는검사입니다.

 

India Ink Staining

이것은 C. neoformans의 특징적인 다당류 캡슐을 검출하기 위한 간단하지만 중요한 테스트입니다. 인디아 잉크 한 방울을 효모 세포가 포함된 샘플과 혼합하면 캡슐이 어둡게 염색된 효모 세포를 둘러싼 투명한 후광으로 나타납니다.

 

1. 깨끗한 현미경 슬라이드를 준비합니다.
2. 슬라이드 위에 ink를 조금 떨어뜨립니다.
3. 접종 루프 또는 바늘을 사용하여 미생물을 포함하는 소량의 샘플 또는 배양액을 슬라이드의 잉크와 혼합합니다.
4. 샘플과 잉크의 혼합물을 슬라이드에 부드럽고 균일하게 펴서 얇게 펴 바릅니다.
5. 슬라이드를 공기 중에서 완전히 건조시킵니다.
6. 일단 건조되면 오일 침지 대물렌즈(100x 배율) 또는 고배율 대물렌즈(40x 또는 50x 배율)를 사용하여 슬라이드를 현미경으로 검사합니다.

현미경으로 관찰할 때 미생물은 투명한 후광으로 둘러싸여 염색되지 않았거나 약하게 염색된 세포로 나타납니다. 후광은 잉크 입자가 침투하지 않는 미생물의 캡슐을 나타냅니다. 어두운 배경(인디아 잉크로 염색)과 세포 주변의 투명한 후광 사이의 대비는 Cryptococcus neoformans와 같은 캡슐이 있는 미생물을 쉽게 시각화하고 식별할 수 있도록 합니다.

 

 

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뇌척수액(CSF) 분석

CSF 분석은 Cryptococcus neoformans 감염의 가장 흔한 징후인 cryptococcal meningitis의 진단에 중요합니다. 뇌척수액 검체를 채취하기 위해 요추 천자를 시행한 후 다양한 검사를 실시합니다.

 

Cryptococcal Ag

매우 민감하고 특이적인 검사인 cryptococcal 항원 검사는 CSF 또는 혈청에서 Cryptococcus neoformans 항원의 존재를 감지합니다. 그것은 크립토코쿠스 감염을 진단하기 위한 표준으로 간주됩니다.

 

CSF Culture

CSF는 Cryptococcus neoformans를 분리하고 동정하기 위해 특정 배지에서 배양됩니다. 진균의 성장이 배양물에서 가시화되기까지 며칠에서 몇 주가 걸릴 수 있습니다. 

허나 CSF 컬쳐에서 컨탐을배제하고 하루라도 양성반응의 콜로니가 나온다면 이는 CVR과 크리티컬벨류에 해당합니다.

 

 

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Blood Culture

 

파종성 크립토코쿠스증이 있는 개인의 경우 크립토코쿠스 네오포르만스의 존재를 확인하기 위해 혈액 배양을 수행할 수 있습니다. 또한 혈액 검사를 실시하여 환자의 면역 상태를 평가하고 감염에 걸리기 쉬운 근본적인 조건을 감지할 수 있습니다.

 

배양 배지: Cryptococcus neoformans는 다양한 유형의 배지에서 자랄 수 있으며 가장 일반적으로 사용되는 것은 Sabouraud dextrose agar(SDA) 또는 Sabouraud dextrose broth(SDB)입니다. 이 배지는 유기체의 성장에 필요한 영양분을 제공합니다.

 

 

urease test

Cryptococcus neoformans는 우레아제 양성입니다. 즉, 우레아를 암모니아와 이산화탄소로 가수분해하는 우레아제 효소를 생성합니다. 우레아제 활동은 우레아 한천 사면을 사용하여 감지할 수 있으며 양성 결과는 암모니아 생성으로 인한 색상 변화로 표시됩니다.

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Phenoloxidase Test

 

크립토코쿠스 네오포르만스는 페놀 화합물을 색소로 전환시키는 효소 페놀옥시다아제를 생성합니다. 이 테스트는 기질 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)가 포함된 배지에 균류를 접종하고 갈색 색소의 발달을 관찰하는 것과 관련됩니다.

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탄수화물 발효

Cryptococcus neoformans는 포도당, 맥아당, 유당 및 자당과 같은 다양한 탄수화물을 발효시킬 수 있습니다. 탄수화물 발효는 Christensen의 우레아 한천 또는 발효 중에 생성된 산의 존재 하에서 색이 변하는 당 동화 테스트 스트립과 같은 특정 매체를 사용하여 결정할 수 있습니다.

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질산염 동화 Nitrate Assimilation

Cryptococcus neoformans는 질산염을 질소원으로 동화시키는 능력이 있습니다. 이것은 질산염 시약이 보충된 질산염 국물 또는 한천을 사용하여 결정할 수 있습니다. 긍정적인 동화는 질산염이 아질산염으로 환원되기 때문에 배지의 색상 변화로 표시됩니다.

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다른 온도에서의 성장: Cryptococcus neoformans는 일반적으로 인체 온도인 37°C에서 잘 자랍니다. 이 특성은 낮은 온도에서 더 잘 자랄 수 있는 다른 종과 구별하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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조직병리학적 검사

어떤 경우에는 폐, 피부 병변 또는 기타 감염 부위와 같은 영향을 받는 기관에서 조직 샘플을 얻기 위해 생검을 수행할 수 있습니다. 조직 샘플을 처리하고 현미경으로 검사하여 Cryptococcus neoformans의 특징적인 효모 세포를 식별합니다. PAS(periodic acid-Schiff) 또는 mucicarmine 염색과 같은 특수 염색 기술은 진균 세포와 캡슐을 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다.

 

혈청학적 검사

앞에서 언급한 크립토코쿠스 항원 검사에 추가하여 혈청학적 검사를 수행하여 크립토코쿠스 네오포르만스에 대한 특정 항체를 검출할 수 있습니다. 이 테스트는 항원 테스트가 음성이거나 결정적이지 않은 경우에 유용합니다. 혈청학적 검사에는 효소 면역분석(EIA), 라텍스 응집 분석 및 면역확산 분석이 포함됩니다. 혈청 또는 뇌척수액 샘플에서 수행할 수 있습니다.

 

분자 기법

PCR(polymerase chain reaction) 분석과 같은 분자 기법을 사용하여 임상 시료에서 Cryptococcus neoformans DNA의 존재를 검출할 수 있습니다. PCR은 매우 민감하며 곰팡이를 신속하고 구체적으로 식별할 수 있습니다. 배양과 같은 다른 진단 방법이 음성 결과를 산출할 때 특히 유용할 수 있습니다.

 

항진균제 감수성 검사

항진균제 감수성 검사는 다른 항진균제에 대한 Cryptococcus neoformans 분리주의 감수성을 결정하기 위해 수행될 수 있습니다. 이는 특히 치료 실패 또는 재발성 감염의 경우 적절한 항진균 요법 선택을 안내하는 데 도움이 됩니다.

 

실험실 안전

실험실에서 Cryptococcus neoformans로 작업하려면 적절한 안전 조치를 준수해야 합니다. 이 곰팡이는 BSL-2(Biosafety Level 2) 병원체로 분류되며 검사실 직원은 임상 검체를 취급하고 처리하기 위해 확립된 프로토콜을 따라야 합니다. 엄격하게는 여기에 개인 보호 장비(PPE) 사용, 생물학적 안전 작업대에서 작업, 적절한 소독 및 폐기물 관리 절차 구현이 포함됩니다.

 

Cryptococcus gattii

이전에 다양한 Cryptococcus neoformans로 간주되었던 Cryptococcus gattii는 현재 별개의 종으로 인식되고 있습니다. 특히 면역력이 약한 사람에게 심각한 호흡기 및 중추신경계 감염을 일으킬 수 있습니다. Cryptococcus gattii는 특정 나무 종을 포함하여 특정 환경적 틈새와 관련이 있으며 주로 열대 및 아열대 지역에서 발견됩니다.

Cryptococcus neoformans는 숙주-병원체 상호작용, 병인, 유전체학 및 약물 개발과 같은 다양한 측면을 포괄하는 활발한 분야입니다. 연구의 목적은 곰팡이 생물학에 대한 우리의 이해를 높이고, 치료 개입을 위한 잠재적 표적을 식별하고, 새로운 항진균제를 개발하는 것입니다.

 

감염 중에 주로 효모 형태로 발견됩니다. 효모 세포는 일반적으로 모양이 둥글거나 타원형이며 크기는 직경이 약 2~20마이크로미터입니다. 그들은 개별 세포 또는 작은 클러스터로 관찰할 수 있습니다.