1)CLSI - M100 항균제 감수성 시험 지침 Enterococcus spp

 CLSI는 굉장히 방대하고 많으며 주제별 카테고리별로 다루는 내용도 굉장히 다릅니다.

문서에는 다양한 표가 포함되어 있으며, 각 표는 특정한 세균이나 시험 방법에 대한 데이터를 제공합니다. 예를 들어, Enterobacterales, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus spp., Streptococcus pneumoniae와 같은 미생물 그룹별로 표가 구분되어 있습니다. 일반적으로 항균제, 시험 결과 해석 기준(MIC와 같은 최소 억제 농도 및 디스크 확산 시험의 경우 구역 지름), 품질 관리(QC) 범위를 포함합니다.

Enterococcus spp.에 대한 시험 지침.

 

1. 기본 시험 방법

A. 디스크 확산법 (Disk Diffusion Method)

Enterococcus spp.에 대한 일차 감수성 평가에 사용되며, 일반적으로 반코마이신, 테이코플라닌, 리네졸리드, 다프토마이신과 같은 주요 항균제를 평가합니다.

 

절차

멸균된 면봉으로 배양된 균을 Mueller-Hinton 아가 플레이트에 도말합니다.
각 항균제의 디스크를 표면에 놓고 35°C에서 16-18시간 배양합니다.
구역 지름을 측정하여 감수성, 중간 감수성, 내성으로 해석합니다.

B. 최소 억제 농도 (Minimum Inhibitory Concentration, MIC) 시험
MIC 시험은 디스크 확산법의 한계를 보완하고 보다 정밀한 항균제 감수성 데이터를 제공합니다. 특히 다제내성 Enterococcus faecium 같은 균주에서 사용이 권장됩니다.

절차

브로스 미량 희석법 (Broth Microdilution Method): 표준화된 미생물 농도에서 다양한 농도의 항균제가 포함된 브로스에 접종하고 24시간 배양 후 탁도를 확인합니다.
MIC 값은 균의 성장을 억제하는 항균제의 최저 농도로 정의됩니다.

2. 중요한 항균제 및 해석 지침
A. 반코마이신 (Vancomycin)
반코마이신은 Enterococcus spp. 감염 치료에 중요한 역할을 하며, 반코마이신 내성 Enterococcus (VRE)의 검출이 필수적입니다.

해석 지침:
MIC ≤ 2 µg/mL: 감수성
MIC 4-8 µg/mL: 중간 감수성
MIC ≥ 16 µg/mL: 내성

B. 다프토마이신 (Daptomycin)
다프토마이신은 특히 Enterococcus faecium과 같은 내성균주에 대한 치료제로 사용됩니다.

해석 지침:
Enterococcus faecalis: MIC ≤ 4 µg/mL: 감수성
Enterococcus faecium: CLSI가 설정한 특정 브레이크포인트에 따라 해석

 

C. 하이레벨 아미노글리코사이드 내성 (High-Level Aminoglycoside Resistance, HLAR)
Enterococcus spp.는 아미노글리코사이드와 베타-락탐의 병용 요법에 내성을 보일 수 있어, HLAR 시험이 필요합니다.

시험 및 해석:
디스크 확산법: 하이레벨 겐타마이신(120 µg) 및 스트렙토마이신(300 µg) 디스크를 사용하여 내성을 평가합니다. 구역 지름이 특정 기준보다 작으면 고수준 내성으로 간주합니다.

MIC 시험: MIC 값이 겐타마이신 ≥ 500 µg/mL, 스트렙토마이신 ≥ 2000 µg/mL일 경우 내성으로 간주합니다.

3. 품질 관리 (Quality Control, QC)
QC 균주: 실험실에서 사용되는 각 시험 방법에 대해 CLSI는 표준 QC 균주를 권장합니다. 예를 들어, Enterococcus faecalis ATCC 29212는 대부분의 항균제 시험에서 사용되는 QC 균주입니다.

4. 추가적인 시험 지침
A. 베타-락타메이스 생산 검출
Enterococcus spp.의 일부 균주는 베타-락타메이스를 생산하여 베타-락탐 항균제에 내성을 보일 수 있습니다.
Nitrocefin 디스크를 사용하여 베타-락타메이스의 생산 여부를 신속하게 평가할 수 있습니다.

 

B. 내성 유전자 검출

PCR 또는 다른 분자 생물학적 방법을 통해 vanA, vanB 등과 같은 내성 유전자를 검출하여 VRE의 정확한 타입을 확인할 수 있습니다.

반응형

 

---

CLSI에서 설정한 Enterococcus spp.에 대한 브레이크포인트

 

반코마이신 (Vancomycin)
MIC 기준:
감수성(Susceptible): ≤ 2 µg/mL
중간 감수성(Intermediate): 4–8 µg/mL
내성(Resistant): ≥ 16 µg/mL

테이코플라닌 (Teicoplanin)
MIC 기준:
감수성(Susceptible): ≤ 4 µg/mL
중간 감수성(Intermediate): 8–16 µg/mL
내성(Resistant): ≥ 32 µg/mL

다프토마이신 (Daptomycin)
Enterococcus faecalis에 대한 브레이크포인트:
감수성(Susceptible): ≤ 4 µg/mL
Enterococcus faecium에 대한 브레이크포인트:
감수성(Susceptible): CLSI에서 지정한 MIC 값(특정 값은 CLSI 지침에 따라 다를 수 있음)

 

리네졸리드 (Linezolid)
MIC 기준:
감수성(Susceptible): ≤ 2 µg/mL
중간 감수성(Intermediate): 4 µg/mL
내성(Resistant): ≥ 8 µg/mL

암피실린 (Ampicillin)
MIC 기준:
감수성(Susceptible): ≤ 8 µg/mL
내성(Resistant): ≥ 16 µg/mL

하이레벨 겐타마이신 (High-Level Gentamicin)
MIC 기준:
내성(Resistant): ≥ 500 µg/mL

하이레벨 스트렙토마이신 (High-Level Streptomycin)
MIC 기준:
내성(Resistant): ≥ 2000 µg/mL

에리트로마이신 (Erythromycin)
MIC 기준:
감수성(Susceptible): ≤ 0.5 µg/mL
중간 감수성(Intermediate): 1–4 µg/mL
내성(Resistant): ≥ 8 µg/mL

 

Basic Blood culture : CLSI 권장 Part.1