중량 측정법과 분광광도법을 포함하여 여러 가지 피펫 보정 방법이 있습니다. 중량 교정에서 피펫으로 분배된 액체의 무게는 민감한 전자저울에서 측정되고 실제 부피는 액체의 밀도를 기준으로 계산됩니다. 분광광도계 교정에서는 특정 파장에서 액체의 흡광도를 측정하고 액체의 농도를 기준으로 실제 부피를 계산합니다.
보정(Calibration) 프로세스(step)에는 제조업체 또는 사용자가 지정한 대로 피펫에 의해 분배된 액체의 실제 부피와 의도된 부피를 비교하는 작업이 포함됩니다.
피펫의 보정은 실험에서 얻은 결과가 신뢰할 수 있고 정확하다는 것을 보장하는 데 중요합니다. 피펫은 마모, 환경 조건 또는 부적절한 사용과 같은 요인으로 인해 시간이 지남에 따라 부정확해질 수 있습니다. 결과의 오류를 방지할 수 있는 모든 부정확성을 식별하고 수정하는 데 도움이 됩니다.
피펫은 정확하고 정밀한 결과를 보장하기 위해 제조업체 또는 규제 기관에서 권장하는 대로 정기적으로 보정해야 합니다. 교정 기록은 교정 프로세스 및 결과를 문서화하고 측정 추적성을 제공하기 위해 유지되어야 합니다. 피펫의 적절한 유지 관리 및 취급은 수명을 연장하고 시간이 지남에 따라 정확도를 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다.
피펫을 보정하는 단계는 다음과 같습니다.
필요한 재료: 피펫, 피펫 팁, 증류수, 비커, 온도계, 전자저울 및 계량 보트.
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<Calibration step>
1)비커에 증류수를 채웁니다.
2)온도계를 사용하여 물의 온도를 측정하고 값을 기록합니다.
3)계량 보트를 저울에 놓고 영점을 맞춥니다.
4)오염 물질을 없애기 위해 피펫을 닦고 피펫의 끝 부분을 막고 있는 것이 없는지 확인합니다.
(적절한 팁을 부착하고 테스트하려는 볼륨을 설정)
5)액체를 흡입하고 분배하여 팁을 미리 헹굽니다.
6)팁을 물에 담그고 버튼을 첫 번째 정지점까지 누른 다음 손을 떼고 액체를 흡인하여 교정 볼륨을 흡인합니다.
7)팁을 물에서 꺼내기 전에 1초 정도 기다리십시오.
8)계량 보트 바닥에 팁을 대고 버튼을 첫 번째 정지점까지 눌러 계량 보트에 액체를 분배합니다.
9)팁을 물에서 약간 멀리 이동하고 버튼을 두 번째 정지점까지 누릅니다.
10)버튼을 누른 상태에서 계량 보트에서 팁을 들어올립니다.
11)저울에 무게를 기록하고 기록하기 전에 전자저울 숫자가 안정될 때까지 기다려야 합니다.
12)각 시도에 동일한 볼륨을 사용하여 8~10회 반복합니다.
For example: 9.89, 10.01, 10.02, 9.99, 9.95, 10.04, 9.96, 10.01, 9.99, and 9.98. ~~~~~
8~10회 반복한 값의 mean을 : 9.98로 가정
13)
물의 무게가 9.98g이면 공식 V = w * Z에서 w는 물의 무게, Z는 물의 밀도 계수입니다.
( 물질의 질량(w)과 밀도(Z)를 기준으로 물질의 부피(V)를 계산)
25°C의 물을 사용한다는 가정하에 밀도는 0.997g/mL입니다.
|
Temperature (°C)
|
Density (g/mL)
|
|
0
|
0.99987
|
|
4
|
0.99997
|
|
10
|
0.99970
|
|
15
|
0.99910
|
|
20
|
0.99821
|
|
25
|
0.99707
|
|
30
|
0.99565
|
|
40
|
0.99220
|
|
50
|
0.98803
|
|
60
|
0.98320
|
|
70
|
0.97780
|
|
80
|
0.97178
|
|
90
|
0.96529
|
|
100
|
0.95840
|
(물의 밀도는 온도가 높아질수록 감소하므로 뜨거운 물은 위로 올라가고 찬 물은 가라앉습니다.)
따라서 V = w * Z = 9.98 * 0.99707 =
Volume=10.01
따라서 피펫은 약 10.1의 물을 분배할 수 있습니다.
현재 실제 파이펫 분주량을 나타냅니다
14)피펫의 정확도는 A = 100 x B/C 공식을 사용하여 계산할 수 있습니다.
A는 피펫의 정확도를 나타내고 B는 피펫이 분주하는 평균 부피이며 C는 피펫이 분주해야 하는 의도된 값입니다.
B : 위의 13단계에서의 값
C : 피펫에 디스펜싱하도록 설정된 값
결과 정확도 값은 이상적으로 99-101% 사이여야 합니다.
피펫이 제대로 보정된 경우 계산된 정확도 값은 피펫에 설정된 의도된 값에 매우 가깝습니다.
만약 해당 피펫이 10µL을 디스펜싱하도록 설정되어 있고, 평균 부피가 9.968µL이라면, 정확도(accuracy)는 다음과 같이 계산됩니다:
A = 100 x B/C = 100 x 10.1/10 = 101%
따라서, 이 경우 해당 피펫의 정확도는 101%입니다. 이 값은 99-101% 범위 내에 있으므로, 해당 피펫은 적절하게 보정된 것으로 간주될 수 있습니다.
ISO Pipette Calibration
ISO 8655
가장 널리 알려진 국제 표준은 ISO 8655입니다. 이는 "Piston-operated volumetric apparatus"를 위한 일련의 표준을 제공합니다. 이 표준은 다양한 유형의 피펫, 디스펜서 및 분주기의 설계, 생산 및 사용에 대한 지침을 제공합니다.
ISO 8655는 1986년 처음 발표되었으며, 이후 2002년에 개정판이 발표되었습니다. 이러한 국제 표준은 신뢰성 높은 피펫 칼리브레이션과 표준화된 테스트 프로토콜을 보장하며, 효과적인 품질 관리 및 실험실 안전을 위한 필수 요소로 자리 잡았습니다.
ISO는 다음에 다시 다뤄보겠습니다.
감사합니다.
Pipette Calibration part2 : ISO Procedures
앞서서 우리는 검사실 및 실험실과 대학원 등 현재 사용하고 있는 피펫에대한 calibration을 했습니다 이후 내가 직접 사용하고 있는 피펫에 대한 실제 분주량을 알 수 있었죠. 현재의 분주량
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